Stanovenie obsahu kyseliny šťaveľovej v ovocí a zelenine pomocou vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie (HPLC)
1. Experimentálny princíp a návrh metódy
Kyselina šťaveľová, ktorá je bežnou organickou kyselinou v ovocí a zelenine, priamo ovplyvňuje chuť a nutričnú hodnotu potravín. Tento experiment využíva vysokoúčinnú kvapalinovú chromatografiu s reverznou fázou (RP-HPLC). V kyslých podmienkach mobilnej fázy sa kyselina šťaveľová oddeľuje od interferujúcich látok od základnej línie pomocou chromatografickej kolóny C18. Na kvantitatívnu analýzu, založenú na UV absorpčných charakteristikách karboxylových skupín v molekulách kyseliny šťaveľovej, sa používa ultrafialový detektor nastavený na 210 nm.
2. Štandardná krivka a príprava vzorky
Na prípravu štandardných roztokov sa používa metóda gradientového riedenia: presne sa odváži 25,0 mg dihydrátu kyseliny šťaveľovej a zrieď sa ultračistou vodou na 25 ml, aby sa získal zásobný roztok s koncentráciou 1 mg/ml. Ten sa postupne zriedi do série štandardných roztokov s koncentráciou 50, 100, 200, 400 a 800 µg/ml, pričom každá koncentrácia sa injektuje v troch opakovaniach.
Na prípravu vzorky sa používa extrakcia s pomocou mikrovln: odvážte 5,00 g homogenátu ovocia/zeleniny, pridajte 10 ml roztoku kyseliny chlorovodíkovej s koncentráciou 0,1 mol/l, ohrievajte mikrovlnami pri teplote 60 °C počas 10 minút, prefiltrujte cez membránový filter s veľkosťou pórov 0,45 µm a filtrát zozbierajte na testovanie.
3. Optimalizácia chromatografických podmienok
Mobilná fáza je systém 0,01 mol/l dihydrogenfosforečnanu draselného (pH 2,5) – acetonitril (95:5) s prietokom 0,8 ml/min a teplotou kolóny 35 °C. Úpravou pomeru acetonitrilu sa ukazuje, že keď organická fáza prekročí 10 %, retenčný čas kyseliny šťaveľovej sa skracuje na menej ako 3 minúty, ale dochádza k píkovému „tailingu“. Za konečných optimalizovaných podmienok je retenčný čas kyseliny šťaveľovej 4,2 minúty, čím sa dosiahne úplné oddelenie od susednej kyseliny citrónovej a kyseliny jablčnej (rozlíšenie > 1,5).
4. Validácia metódy
Overenie lineárneho rozsahu ukazuje dobrý lineárny vzťah medzi plochou píku a koncentráciou v rozsahu 10–1000 µg/ml (R² = 0,9993). Detekčný limit (LOD), stanovený metódou pomeru signálu k šumu, je 0,5 µg/ml. V testoch opakovateľnosti je RSD pre šesť opakovaných stanovení tej istej vzorky špenátu 1,8 %. Experimenty s výťažnosťou náboja na troch úrovniach (80 %, 100 % a 120 %) prinášajú priemernú výťažnosť 98,2 %, 102,4 % a 97,8 %, čo spĺňa požiadavky na kvantitatívnu analýzu.
5. Analýza reálnych vzoriek
Testovaných bolo šesť komerčne dostupných druhov ovocia a zeleniny: špenát (356 ± 12 mg/100 g), zeler (215 ± 9 mg/100 g), paradajka (18 ± 2 mg/100 g), jablko (6 ± 1 mg/100 g), banán (nezistený) a brokolica (89 ± 5 mg/100 g). Porovnanie s národnou štandardnou metódou (GB 5009.277-2016) ukazuje, že relatívna odchýlka medzi týmito dvoma metódami je menšia ako 5 %, čo potvrdzuje spoľahlivosť tejto metódy. Metóda HPLC vykazuje najmä vyššiu citlivosť ako tradičné titračné metódy pri analýze vzoriek s nízkym obsahom.
6. Kľúčové poznámky
Počas predúpravy vzorky prísne kontrolujte hodnotu pH. Ak pH extraktu prekročí 3, precipitácia oxalátu vápenatého povedie k nízkym výsledkom testu. Mobilná fáza by sa mala pripravovať čerstvá denne, aby sa predišlo precipitácii solí a upchatiu kolóny. Po každých 20 injekciách prepláchnite kolónu zmesou acetonitrilu a vody (30:70) počas 30 minút, aby sa zabránilo zníženiu účinnosti kolóny. Pri vzorkách obsahujúcich pigmenty (napr. fialová kapusta) sa odporúča pred injekciou pridať krok čistenia extrakciou na pevnej fáze.
7. Pokyny pre aplikáciu a rozšírenie
Túto metódu je možné rozšíriť na detekciu kyseliny šťaveľovej v biologických vzorkách, ako je moč a krv. Úpravou zloženia mobilnej fázy (napr. pridaním tetrabutylamóniumhydroxidu) je možné súčasne stanoviť kyselinu šťaveľovú a jej metabolity. V kombinácii s detektorom hmotnostnej spektrometrie je možné zaviesť presnejšiu metódu stopovej detekcie. V potravinárskom priemysle môže táto metóda poskytnúť dôležitú dátovú podporu pre výber odrôd s nízkym obsahom kyseliny šťaveľovej a optimalizáciu procesov varenia.
Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. – kyselina šťaveľová
Spoločnosť Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. je spoľahlivým dodávateľom a vývozcom vysokokvalitnej kyseliny šťaveľovej (priemyselnej kvality, min. 99,6 %) z provincie Shandong v Číne. Naša kyselina šťaveľová je biela kryštalická tuhá látka, známa aj ako kyselina etándiová, s molekulovým vzorcom C₂H₂O₄. Vyznačuje sa vysokou čistotou, nízkym obsahom nečistôt a stabilnou kvalitou vo všetkých šaržiach, čím spĺňa požiadavky textilného, kožiarskeho, metalurgického, spracovateľského, chemického a stavebného priemyslu.
Dodávame bezvodú aj dihydrát kyseliny šťaveľovej, dostupnú v 25 kg vreciach, 50 kg vreciach a 1000 kg vreciach na sypký tovar. Vďaka prísnym postupom kontroly kvality, kompletným protokolom o testoch a flexibilným plánom dodávok zabezpečujeme stabilné dodávky a konzistentný výkon pre globálnych kupujúcich. Naše výrobky sa vo veľkej miere vyvážajú do juhovýchodnej Ázie, Európy, Afriky a Ameriky a získali si uznanie za spoľahlivú kvalitu a konkurencieschopné ceny.
Vyberte si spoločnosť Zibo Anhao Chemical a získajte spoľahlivé dodávky kyseliny šťaveľovej a profesionálne komplexné chemické služby.
Vyberte si spoločnosť Zibo Anhao Chemical, ktorá získava kyselinu šťaveľovú s vysokou čistotou a stabilným výkonom a hodnotou pre vaše podnikanie. Kontaktujte nás pre hromadné objednávky alebo technické špecifikácie: info@anhaochemical.com
